Biểu hiện enzyme Bst Large Fragment (BstLF) và ứng dụng trong phản ứng khuếch đại đẳng nhiệt phát hiện N. meningitidis. Đối tượng và phương pháp: Plasmid pET15b_BstLF_6XHis mã hoá enzyme Bst Large Fragment được biến nạp vào tế bào E. coli BL21(DE3)pLysS. Enzyme Bst Large Fragment được biểu hiện bằng chất cảm ứng đặc hiệu (IPTG) và tinh sạch bằng phương pháp sắc ký ái lực. Đánh giá hoạt tính của enzyme Bst Large Fragment tự sản xuất và so sánh với enzyme thương mại trên mô hình vi khuẩn N. meningitidis. Kết quả: Điều kiện biểu hiện cho hiệu suất tốt nhất ở 37oC trong 4 giờ với 1mM chất cảm ứng IPTG. Bst Large Fragment thu được có độ tinh sạch cao, có hoạt tính tốt. Ứng dụng enzyme BstLF tự sản xuất trong phản ứng LAMP phát hiện N. meningitidis được thiết lập trong vòng 50 phút với độ nhạy 102 bản sao/phản ứng, độ tin cậy 95%. Kết luận: Biểu hiện thành công enzyme BstLF và ứng dụng trong xét nghiệm LAMP phát hiện N. meningitidis với ngưỡng phát hiện là 102 bản sao/phản ứng tương đương với enzyme thương mại Bst 3.0 DNA Polymerase.
Expression of Bst Large Fragment enzyme (BstLF) and its application in isothermal amplification for detecting N. meningitidis. Subject and method: E. coli BL21(DE3) pLysS cells were transformed with pET15b_BstLF_6XHis encoding plasmid was then induced with the specific inducer (IPTG); Using the affinity chromatography method. Its function was evaluated and compared with the commercial enzyme in the LAMP reaction for identifying N. meningitidis. Result: The best condition for expression of high-quality recombinant Bst Large Fragment enzyme in 37oC, 1mM IPTG in four hours. The reaction using an in-house enzyme for detecting N. meningitidis was established in 50 minutes. The sensitivity achieved was 102 copies/reaction (confidence is 95%). Conclusion: Expression of BstLF enzyme and its application in LAMP assay for detecting N. meningitidis with a detection limit of 102 copies/reaction, equivalent to commercial Bst 3.0 DNA Polymerase enzyme.
- Đăng nhập để gửi ý kiến