Interleukin (IL)-33 là một thành viên mới trong họ IL-1, đóng vai trò quan trọng trong các phản ứng miễn dịch ở người thông qua tương tác với thụ thể ST2. Do đó, IL-33 là một đích tác động tiềm năng để phát triển các thuốc điều trị các bệnh lý liên quan IL-33. Nhóm nghiên cứu đã thành công tạo dòng Escherichia coli mang plasmid biểu hiện IL-33 người tái tổ hợp dạng dung hợp với tag SUMO. Mục đích: khảo sát các điều kiện nuôi cấy và tinh chế IL-33 người tái tổ hợp. Phương pháp: Khảo sát các điều kiện nuôi cấy để thu protein dạng tan: môi trường (LB, TB, ZYP-5052); nhiệt độ (25°C và 37℃). Tinh chế IL-33 dạng dung hợp bằng sắc ký ái lực cố định ion kim loại (IMAC) Kết quả: Chủng E. coli BL21(DE3) tái tổ hợp có khả năng tạo SUMO-IL-33 dạng tan với hiệu suất cao trong môi trường tự cảm ứng ZYP-5052 ở 25℃. Từ 50mL dịch nuôi cấy tinh chế qua cột Ni Sepharose thu được khoảng 20 mg protein. Kết luận: Nghiên cứu đã khảo sát được các điều kiện nuôi cấy và tinh chế thích hợp để thu IL-33 tan ở dạng dung hợp với tag SUMO với hiệu suất cao.
Interleukin (IL)-33 is a new member of the IL-1 superfamily that plays crucial roles in human immune responses via interaction with its ST2 receptor. IL-33 thus appears an attractive target for the drug development against IL-33 related disorders. Our research group has successfully transformed Escherichia coli with plasmid bearing human il33 gene fused with SUMO tag. Objectives: This study aims to examine the culture conditions and the purification process to obtain the recombinant IL-33. Methods: Expression conditions for optimal soluble recombinant IL-33 were examined, including culture medium (LB, TB, ZYP-5052); temperature (25°C and 37℃). The recombinant IL-33 fused with SUMO tag was purified by immobilized metal affinity chromatography method (IMAC). Results: The transformed E. coli BL21(DE3) can express soluble SUMO-IL-33 with high yield in autoinduction medium ZYP-5052 at 25°C. From 50 mL of bacterial culture, we obtained approximately 20 mg of purified protein by Ni Sepharose column. Conclusion: In this study, we have examined the culture and the purification conditions suitable to obtain soluble SUMO-IL-33 with high yield.
- Đăng nhập để gửi ý kiến