Nghiên cứu phân lập 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid làm chất đối chiếu từ cây Xuyên tâm liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees). Đối tượng và phương pháp: Đối tượng nghiên cứu là cây Xuyên tâm liên thu hái tại Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp vào tháng 01.2015. Mẫu đã được xác định tên khoa học tại Bộ môn Thực vật, Khoa Dược – Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh là Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees, họ Ô rô (Acanthaceae) và được lưu giữ tại Khoa Kiểm nghiệm Đông dược - Dược liệu, Viện Kiểm nghiệm Thuốc Thành Phố Hồ Chí Minh. Nghiên cứu được thực hiện là chiết xuất, phân lập và tinh chế 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid. Xác định cấu trúc bằng phương pháp phổ tử ngoại, phổ hồng ngoại, phổ khối MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân với các kỹ thuật đo 1H-NMR, 13C-CPD, DEPT, HSQC, HMBC, COSY. Tiến hành kiểm tra độ tinh khiết bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng, sắc ký lỏng hiệu năng cao, phương pháp phân tích nhiệt vi sai. Định lượng 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid và thẩm định quy trình bằng phương pháp sắc ký lỏng với các chỉ tiêu: tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại, độ tái lặp, độ đúng. Kết quả: Từ 3,1 kg bột dược liệu lá Xuyên tâm liên được chiết nóng ở 70 C với methanol, thu được 514,26 g cao toàn phần methanol (MO). Kết tinh lạnh qua đêm thu được 506,65 g cao methanol (M) đã tách andrographolid, lắc phân bố tuần tự với dung môi n-hexan (loại tạp), cloroform thu được cao cloroform (414,83 g). Lấy 15,2 g cao cloroform tiến hành sắc ký cột cổ điển (Cột I). Rửa giải với dung môi cloroform – ethyl acetat thay đổi từ (100 : 0) đến (75 : 25) thu được 800,25 mg chất DP ở dạng tinh thể hình kim, tiếp tục tinh chế bằng cách qua sắc ký cột cổ điển (Cột II) với hệ cloroform – ethyl acetat thay đổi từ (100 : 0) đến (95 : 5) thu được 700,32 mg chất ở dạng tinh thể hình kim màu trắng (DP). Từ kết quả phân tích phổ UV, IR, MS, NMR cho thấy cấu trúc của chất DP là 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid tương ứng với công thức C20H28O4. Kiểm tra độ tinh khiết bằng HPLC có độ tinh khiết 99,99%. Xác định hàm lượng 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid là 96,51 %. Qui trình định lượng đã được thẩm định. Thiết lập chất đối chiếu 14- deoxy-11,12-didehydroandrographolid theo qui trình định lượng đã được thẩm định. Xác định độ tinh khiết sắc ký thông qua đánh giá liên phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn GLP và ISO 17025, mỗi phòng 6 lọ ngẫu nhiên. Từ kết quả của 3 PTN, xác định giá trị ấn định theo ISO 13528. Giá trị ấn định của 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolid sau khi tính toán là 96,51%.
To study the isolation of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide as a reference from Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees. Subjects and methods: Green chiretta collected in Cao Lanh, Dong Thap province in January 2015. The specimen has been identified with the scientific name at the Department of Botany, Faculty of Pharmacy - University of Medicine and Pharmacy, Ho Chi Minh City as Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees, Acanthaceae and kept at the Faculty of Control Oriental Medicine - Medicinal Materials Laboratory, Institute of Drug Quality Control, Ho Chi Minh city. The extraction, isolation and purification of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide were conducted. The structure was determined by methods of ultraviolet spectroscopy, infrared spectroscopy, MS mass spectrometry, and nuclear magnetic resonance spectroscopy with measurement techniques 1H-NMR, 13C-CPD, DEPT, HSQC, HMBC, COSY. Purity testing was carried out by thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, and differential thermal analysis. The quantification of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide was developed and validated by liquid chromatography with the following criteria: system suitability, specificity, linearity, repeatability, reproducibility, and precision. Results: From 3.1 kg of herbal powder of green chiretta leaves, which were hot-extracted at 70oC with methanol, 514.26g of total methanol (MO) were obtained. Overnight cold crystallization obtained 506.65 g of methanol (M) separated andrographolide, sequentially distributed shaking with n-hexane solvent (impurity), chloroform obtained high chloroform (414.83 g). 5.2 g of high chloroform was taken and conducted classical column chromatography (Column I). The mixure was eluted with chloroform - ethyl acetate solvent varying from (100 : 0) to (75 : 25) yielding 800.25 mg of DP in the form of needle crystals and further purified by classical column chromatography. (Column II) with the chloroform - ethyl acetate system varying from (100 : 0) to (95 : 5), 700.32 mg of the substance was obtained in the form of white needle-shaped crystals (DP). From the results of UV, IR, MS, and NMR spectrum analysis, the structure of DP is 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide, corresponding to the formula C20H28O4. Purity check by HPLC was 99.99 %. The content of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide was 96.51%. The quantification procedure has been validated. 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide was established as reference standard according to validated quantitative procedure. Chromatographic purity was determined through interlaboratory evaluation to GLP and ISO 17025 standards, each laboratory received 6 random vials. From the results of 3 laboratories, the assigned value was determined according to ISO 13528. The assigned value of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide after calculation was 96.51%.
- Đăng nhập để gửi ý kiến