Cordyceps militaris là loài nấm dược liệu chứa nhiều hoạt chất có lợi cho sức khỏe như cordycepin, adenosine, pentostatin, polysaccharide, carotenoid. Tuy nhiên, hàm lượng của các hợp chất này ở các chủng nấm tự nhiên tương đối thấp. Gần đây, hệ gen của C. militaris đã được giải trình tự hoàn toàn và các gen liên quan đến sinh tổng hợp các chất có lợi đã được xác định. Do đó, việc nghiên cứu tăng cường sinh tổng hợp các hoạt chất quý ở C. militaris nhờ công nghệ DNA tái tổ hợp có nhiều thuận lợi. Trong nghiên cứu này, các tác giả đã tạo thành công vector nhị thể với vùng T-DNA mang cấu trúc tăng cường biểu hiện gen dưới sự điều hòa bởi promoter rpb1 từ chính loài C. militaris. Cấu trúc T-DNA từ vector nhị thể được chuyển vào hệ gen nấm nhờ phương pháp chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens. Phân tích ngẫu nhiên một số thể chuyển gen bằng PCR với các cặp mồi đặc hiệu chứng minh cấu trúc T-DNA đã được tích hợp thành công vào hệ gen C. militaris. Quan sát các thể chuyển gen dưới kính hiển vi huỳnh quang xác nhận sự biểu hiện mạnh của gen mã hóa protein huỳnh quang đỏ DsRed dưới sự điều hòa của promoter rpb1. Vector nhị thể mang promoter rpb1 tạo được trong nghiên cứu này có thể được sử dụng để tăng cường sự biểu hiện của các gen mong muốn ở nấm dược liệu C. militaris.
Cordyceps militaris is a valuable medicinal mushroom that contains numerous bioactive ingredients such as cordycepin, adenosine, pentostatin, polysaccharides, and carotenoids. However, the contents of these substances in wild-type strains of C. militaris are relatively low. Recently, the genome of C. militaris has been fully sequenced, and genes involved in the biosynthesis of beneficial constituents have been identified. Therefore, research on enhancing the biosynthesis of the bioactive compounds in this fungus by recombinant DNA technology has advantages. In the present study, the authors have successfully generated a binary vector with a T-DNA region carrying a construct regulated by the native rpb1 promoter that can enhance gene expression in C. militaris. The T-DNA structure from the binary vector was then transferred into the C. militaris genome by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Analysis of some fungal transformants by PCR using the specific primer pairs indicated that the T-DNA structure was successfully integrated into the fungal genome. Observation of the transformants under fluorescence microscopy confirmed the overexpression of the DsRed fluorescent protein under the regulation of the rpb1 promoter. The binary vector carrying the rpb1 promoter constructed in this study can be employed to promote the expression of target genes in the medicinal mushroom C. militaris.
- Đăng nhập để gửi ý kiến