Tạo dòng Escherichia coli biểu hiện ribonuclease H tái tổ hợp từ Thermus thermophilus

Ribonuclease H thủy phân đặc hiệu liên kết phosphodiester của phân tử lai RNA-DNA. Thermus thermophilus RNase H được biểu hiện uá mức trong Escherichia coli dưới dạng protein tái tổ hợp sẽ tạo ra nguồn cung cấp enzyme RNase H thể hiện được hoạt tính ở nhiệt độ cao và ít bị biến tính hay bất hoạt trong các điều kiện cực đoan. Mục tiêu: Tạo dòng Escherichia coli tái tổ hợp biểu hiện Ribonuclease H có nguồn gốc từ Thermus thermophilus. Đối tượng và Phương pháp nghiên cứu: Plasmid pET.RiboH được cấu trúc từ plasmid pET28b(+) và đoạn gen RiboH từ Thermus thermophilus và biến nạp plasmid vào E. coli. Ribonuclease H được thu nhận và tinh chế bằng sắc kí trao đổi cation ua cột SP-sepharose. Kết quả: Tạo dòng thành công chủng E. coli BL21(DE3) chứa plasmid pET.RiboH được cảm ứng biểu hiện Ribonuclease H bằng IPTG. Lượng Ribonuclease H thu nhận được sau tinh chế bằng sắc ký trao đổi cation là 33,8 mg/L dịch nuôi cấy. Hoạt tính thủy phân liên kết phosphodiester của RNase H tái tổ hợp được kiểm tra bằng cách ủ với phân tử lai RNA-DNA và kiểm tra sản phẩm cắt bằng điện di trên gel agarose. Kết luận: Chủng E. coli mang plasmid tái tổ hợp có khả năng biểu hiện Ribonuclease H thể hiện được hoạt tính thủy phân đặc hiệu liên kết phosphodiester của phân tử lai RNA-DNA.