Thiết lập được quy trình xác định kiểu gen tại điểm đa hình ABCB1 3435C>T (rs1045642) bằng phương pháp PCR-RFLP và khảo sát sự ảnh hưởng của đa hình gen ABCB1 đối với liều, nồng độ tacrolimus ở bệnh nhân ghép thận. Đối tượng và phương pháp: 100 bệnh nhân sau ghép thận được điều trị bằng tacrolimus tại Khoa Thận, lọc máu - Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân y. Các mẫu máu được thu thập để xác định đa hình di truyền của ABCB1 và theo dõi nồng độ tacrolimus. Thiết kế mồi và lựa chọn enzyme giới hạn cho thiết lập quy trình xác định kiểu gen tại điểm đa hình ABCB1 3435C>T (rs1045642). Phân tích mối liên quan giữa các kiểu gen thu được với liều và nồng độ TAC tại các thời điểm khảo sát. Kết quả: Một đoạn gen kích thước 244bp chứa điểm đa hình ABCB1 3435C>T (rs1045642) được khuếch đại với cặp mồi đặc hiệu. Enzym MboI nhận diện trình tự cắt sản phẩm PCR tạo ra các đoạn có kích thước lần lượt là 172bp và 68bp đối với điểm đa hình là allele C hay kiểu gen đồng hợp CC. Khi điểm đa hình là allele T thì enzyme MboI cắt sản phẩm PCR tạo ra đoạn có kích thước tương ứng là 244bp hay kiểu gen đồng hợp TT. Kiểu gen dị hợp CT tương ứng với các đoạn có kích thước lần lượt là 244, 172, 68bp. Khảo sát sự ảnh hưởng kiểu gen ABCB1 3435C>T (rs1045642) đối với liều nồng độ tacrolimus ở bệnh nhân sau ghép thận tại các khoảng thời gian 1 tuần, 1 tháng, 3 tháng, 6 tháng và 12 tháng cho thấy chưa có sự ảnh hưởng của đa hình gen này đến chuyển hoá thuốc tacrolimus. Kết luận: Chúng tôi đã lập được quy trình đơn giản, dễ thực hiện cho xác định kiểu gen ABCB1 3435C>T (rs1045642). Chưa thấy có sự ảnh hưởng của đa hình ABCB1 3435C>T (rs1045642) đến liều, nồng độ tacrolimus ở bệnh nhân sau ghép thận
To develop an in-house method for genotyping of ABCB1 genetic polymorphism and analyze its impact on the concentration and dose of tacrolimus in renal transplant patients. Subject and method: A total of 100 patients after kidney transplant were treated with tacrolimus at the Department of Nephrology and Dialysis - 103 Military Hospital, Military Medical University. Blood samples were collected to identify ABCB1 genetic polymorphisms of and monitor Tacrolimus levels. Primer design and restriction enzyme selection for setting up the genotyping of the polymorphism at 3435C>T (rs1045642). Analyzing the relationship between ABCB1 genotypes obtained with doses and concentrations of TAC at the time points of follow up. Result: In this study, a fragment 244bp containing ABCB1 3435C>T (rs1045642) genetic polymorphism was amplified by PCR. Enzyme MboI recognize the PCR product cutting sequence which generates 2 fragments of 172bp and 68bp, respectively, for the C allele or CC homozygous genotype. When the polymorphism is the T allele, the MboI enzyme cuts the PCR product to create a fragment with the corresponding size of 244bp or homozygous genotype TT. The CT heterozygous genotype corresponds to fragments with sizes of 244, 172, 68bp, respectively. There was no significant difference between ABCB1 3435C>T (rs1045642) genotypes and concentrations and doses of tacrolimus at different time points investigated. Conclusion: We have established a simple and reliable method for genotyping ABCB1 3435C>T (rs1045642). No effect of the polymorphism ABCB1 3435C>T (rs1045642) has been found in relation to the dose and concentration of tacrolimus in patients after kidney transplantation.
- Đăng nhập để gửi ý kiến