Xây dựng quy trình phát hiện đột biến gen PARK7 bằng giải trình tự Sanger trên 20 bệnh nhân Parkinson khởi phát sớm. Phương pháp: Thu thập mẫu máu ngoại vi của 20 bệnh nhân PD khởi phát sớm, tách chiết DNA toàn phần, thiết kế mồi và chuẩn hóa quy trình PCR khuếch đại 7 exon của gen PARK7. Thực hiện giải trình tự các exon này và so sánh kết quả với trình tự chuẩn từ cơ sở dữ liệu của Trung tâm Thông tin Công nghệ Sinh học Quốc gia Hoa Kỳ (NCBI) nhằm phát hiện các biến thể trên 20 mẫu bệnh nhân. Kết quả: Thiết kế được các đoạn mồi phù hợp, chuẩn hóa được quy trình giải trình tự Sanger gen PARK7. Phát hiện 1 biến thể dị hợp tử c.103G>A (p. Val35Ile) trên exon 2 của 1 bệnh nhân. Kết luận: Nghiên cứu đã tự thiết kế các cặp mồi có tính đặc hiệu cao, khuếch đại được các exon mục tiêu qua kết quả PCR và giải trình tự. Xây dựng và tối ưu thành công quy trình giải trình tự Sanger các exon trên gen PARK7. Nghiên cứu này là tiền đề thực hiện các quy trình giải trình tự các gen liên quan đến bệnh lý Parkinson.
To standardize sequencing protocol for detecting PARK7 gene mutations in 20 early-onset Parkinson's patients. Methods: Peripheral blood samples were collected in 20 early-onset Parkinson’s patients. Genomic DNA was extracted, primers were designed and the protocol for PARK7 gene sequencing was developed. The sequencing results were aligned with PARK 7 reference sequence in the National Center for Biotechnology Information. Results: Appropriate primers were designed, PCR and sequencing protocol were standardized to successfully amplify and sequenced 7 exons of PARK7 gene. One heterozygous variant c.103G>A (p. Val35Ile) was detected. Conclusion: The research has designed primer pairs with high specificity, amplifying the target exons through PCR and sequencing results. Sanger sequencing process of all exons of PARK7 gene were optimized. This study will pave the way for further studies on other genetic causes of PD.
- Đăng nhập để gửi ý kiến