Tạo dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên tái tổ hợp Alpha-Fetoprotein (AFP) trên chuột nhắt trắng thuần chủng BALB/c. Phương pháp nghiên cứu: Gây miễn dịch cho chuột nhắt trắng thuần chủng BALB/c, phục hồi tế bào myeloma, cấy chuyển và nhân giống tế bào myeloma, sàng lọc tế bào lai có khả năng tiết kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên tái tổ hợp AFP, đánh giá và kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phương pháp ELISA, lựa chọn và gây báng trên chuột BALB/c, thu nhận dịch báng chuột và đánh giá hiệu giá kháng thể bằng phương pháp ELISA. Kết quả: Kháng nguyên tái tổ hợp AFP (nồng độ 400μg/ml) được phối trộn với chất bổ trợ FIA, tiêm vào chuột với tổng thể tích là 50μl/ con. Tách tế bào lympho B từ hạch lách và hạch bẹn của chuột, Dung hợp tế bào bằng chất xúc tác PEG và bổ sung môi trường DMEM, Dịch huyền phù tế bào sau dung hợp được nuôi trong đĩa 96 giếng, ngày thứ 10 nuôi cấy tế bào đạt khoảng 80% độ phủ bề mặt. Mỗi kháng nguyên tái tổ hợp chọn được 2 dòng sinh kháng đặc hiệu với kháng nguyên tái tổ hợp AFP, tăng số lượng tế bào và thu nhận thành công 2 dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên tái tổ hợp và sử dụng để gây báng trên chuột BALB/c. Dịch báng được đánh giá kháng thể cho kết quả hàm lượng kháng thể đơn dòng trong dịch báng thu được từ hai dòng tế bào AFP1 và AFP2 đều rất cao. Kết luận: Tạo thành công 2 dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên tái tổ hợp AFP là AFP1 và AFP2.
To create a hybrid cell line producing monoclonal antibodies against recombinant Alpha-Fetoprotein (AFP) antigen in purebred BALB/c mice. Methods: Immunize purebred BALB/c mice, recover myeloma cells, transplant and proliferate myeloma cells, screen hybrid cells capable of secreting antibodies specific to recombinant AFP antigen, evaluate and test antibody titers by ELISA method, select and induce ascites in BALB/c mice, collect mouse ascites fluid and evaluate antibody titers by ELISA method. Results: Recombinant AFP antigen (concentration 400μg/ml) was mixed with FIA adjuvant, injected into mice with a total volume of 50μl/ mouse. Lympho B cells were separated from the lymph nodes and spleen of the mouse, cell suspension was made with PEG catalyst and supplemented with DMEM medium, cell suspension was cultured in 96 wells plate, on the 10th day of culture, the cells reached about 80% surface coverage. Each recombinant antigen selected 2 specific antibody-producing lines with recombinant AFP antigen, increased the number of cells and successfully obtained 2 hybrid cell lines producing monoclonal antibodies against recombinant antigen and used to induce ascites in BALB/c mice. The ascites fluid was evaluated for antibodies, the results showed that the monoclonal antibody content in the ascites fluid obtained from the two cell lines AFP1 and AFP2 was very high. Conclusion: Successfully created 2 hybrid cell lines secreting monoclonal antibodies specific to recombinant AFP antigen, namely AFP1 and AFP2.
- Đăng nhập để gửi ý kiến