Các nghiên cứu gần đây cho thấy interleukin (IL)-33 và thụ thể đóng vai trò quan trọng trong các bệnh lí viêm, nhiễm trùng và tự miễn. Tuy nhiên, việc chiết xuất IL-33 trực tiếp từ các mô gặp nhiều khó khăn và lượng protein chiết được rất thấp gây trở ngại cho nghiên cứu phát triển thuốc ức chế cytokin này. Mục đích: tạo được IL-33 người tái tổ hợp dạng dung hợp với tag SUMO trên Escherichia coli. Phương pháp: gen mã hoá cho IL-33 người được tối ưu hóa codon cho biểu hiện trên E. coli bằng phần mềm OptimumGeneTM Optimization Analysis của công ty GeneScript. Plasmid pET-SUMO-il33 được biến nạp vào E. coli BL21(DE3) bằng phương pháp sốc nhiệt. Kết quả: Plasmid tái tổ hợp chứa gen il33 được thiết kế gắn tag gồm 8×His và SUMO tag ở đầu N tận với gen il33 được tối ưu hoá codon cho biểu hiện trên E. coli. Tế bào E. coli BL21(DE3) mang pET-SUMO-il33 có khả năng biểu hiện IL-33 tái tổ hợp dưới dạng tan trong môi trường LB ở 37 ℃. Kết luận: Nghiên cứu đã tạo dòng thành công chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il33 có khả năng tạo IL-33 tan ở dạng dung hợp với tag SUMO với hiệu suất cao.
Recent studies showed that interleukin (IL)-33 and its receptor play an important role in inflammation, infection, and autoimmune diseases. Nevetheless, direct extractions of IL-33 from human tissues often resulted in limited amount of this cytokine, which may hinder the drug discovery process. Objectives: This study aims to express recombinant human IL-33 fused with SUMO in Escherichia coli. Methods: codons from human il33 gene was optimized for the expression in E. coli using OptimumGeneTM Optimization Analysis (GeneScript). The recombinant plasmid pET-SUMO-il33 was transformed into chemically compentent E. coli BL21 (DE3) by heat-shock method. Results: The recombinant plasmid was designed with a 8×His and a SUMO tag at the N-terminal of the codon-optimized il33 gene. The transformed E. coli BL21(DE3) could express soluble recombinant IL-33 in LB medium at 37°C. Conclusion: In this study, we have successfully transformed E. coli BL21(DE3) with the recombinant plasmid pET-SUMO-il33. The bacteria could express soluble SUMO-IL-33 with high yield.
- Đăng nhập để gửi ý kiến