Bệnh Toxocariasis là một bệnh giun sán phổ biến lây truyền từ động vật sang người do các loài giun tròn Toxocara canis and Toxocara cati gây ra. Để chẩn đoán bệnh Toxocariasis chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng, các yếu tố dịch tễ và huyết thanh học tìm kháng thể khángToxocara. Trong đó kết quả huyết thanh học của kỹ thuật ELISA được sử dụng chủ yếu để đưa ra kết luận chẩn đoán. Tuy nhiên kỹ thuật ELISA sử dụng nguồn kháng nguyên tiết mặc dù có độ nhạy cao nhưng bị hạn chế nguồn cung kháng nguyên và phản ứng chéo với kháng nguyên của các loài giun khác. Do đó để chủ động trong việc tạo ra nguồn kháng nguyên ổn định, có độ đặc hiệu cao sử dụng cho kỹ thuật ELISA thì protein tái tổ hợp là một lựa chọn thay thế. Mục tiêu: Tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp TES120 của Toxocara canis để tạo nguồn kháng nguyên chủ động và ứng dụng vào kỹ thuật ELISAKết quả nghiên cứu: Đoạn gien mã hoá TES120 của Toxocara canis đã được phân lập từ mẫu T. canis trưởng thành thu thập tại Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng TP. HCM và biểu hiện trên hệ thống vi khuẩn E. coli. Đoạn gien TES120 có kích thước 501 bp được khuếch đại sau đó ghép nối vào vector pET28a+ và được biến nạp vào tế bào vi khuẩn E. coli BL21 để biểu hiện protein. Protein tái tổ hợp TES120 được biểu hiện ở 37oC trong 6 tiếng, có kích thước khoảng 21 kDa. Kết luận: Protein tái tổ hợp TES120 sẽ được sử dụng làm kháng nguyên cho việc phát triển test ELISA chẩn đoán bệnh giun đũa chó/mèo.
Human toxocariasis is a worldwide disease and it is caused by zoonotic roundworm species Toxocara canis and Toxocara cati. Diagnosis of human toxocariasis is based on the combination of clinical, epidemiological criteria, as well as serology tests that detect anti-Toxocaraantibodies. Notwithstanding, serology is the key evidence to support a conclusive diagnosis. TES-ELISA is the most widely used serological test for diagnosis. However, insufficience of sources and cross-reaction of TES antigens with antibodies produced to other helminth antigens are major drawbacks for its application. Therefore, T. canis recombinant antigens have been decribed as an alternative to native TES for diagnosis. Objective: The aim is to clone and express the recombinant protein TES120 of Toxocara canis to produce an actively source of antigen and to apply to ELISA.Results:T. canis TES120 gene was isolated from T. canis adult worms (collected in Institute of Malariology, Parasitology and Entomology in Ho Chi Minh City) and expressed in E. coli expression system. TES120 gene had the size of 501 bp and was successfully inserted to pET28a. Then, plasmid pET28a-TES120 was transformed into E.coli BL21. Finally, TES120 recombinant protein was expressed at 37oC in 6h and had the size of 21 kDa. Conclusion: TES120 recombinant protein will be used as an antigen to develop ELISA test fortoxocariasis.
- Đăng nhập để gửi ý kiến