Thiết kế phản ứng TTSS1-real-time LAMP xác định vi khuẩn B. pseudomallei gây bệnh melioidosis. Vật liệu và phương pháp: Ba bộ mồi LAMP đã được tham khảo, thiết kế và thử nghiệm trong phản ứng real-time LAMP, nhắm vào vùng gen đích orf11-TTSS1. Bộ mồi hoạt động hiệu quả nhất được lựa chọn để tối ưu phản ứng real-time LAMP với nồng độ mồi tiêu chuẩn 1,6; 0,2; 0,4 µM (FIP/BIP, B3/F3, LF/LB) pha loãng theo các mức là 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 và 1X sử dụng WarmStart LAMP Master Mix (New England BioLabs, Mỹ). Phản ứng realtime LAMP với bộ mồi tối ưu được khảo sát giới hạn phát hiện ở dải nồng độ DNA pha loãng 103 - 102 -101 -4-2-1 copy/µl, đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu trên các mẫu đối chứng là B. pseudomallei, P. aeruginosa và B. cepacia, có so sánh với PCR. Kết quả và kết luận: Phản ứng real-time LAMP với bộ mồi 2 tối ưu phát hiện chính xác vi khuẩn B. pseudomallei khi đánh giá trên các chủng đối chứng, đạt ngưỡng phát hiện 4 copy/μl, thời gian chẩn đoán trong 30 phút trên hai hệ thống là RotorGene Q (Qiagen, Đức) và Genie III (OptiGene, Anh) với điều kiện ủ ổn nhiệt 65o C, hiệu quả vượt trội so với phản ứng PCR xác định B. pseudomallei. Phản ứng này có tiềm năng phát triển thành kit phát hiện nhanh tại hiện trường và là công cụ hữu ích góp phần dự phòng, điều trị bệnh melioidosis do tác nhân sinh học B. pseudomallei.
- Đăng nhập để gửi ý kiến