Cordyceps militaris là một loài nấm dược liệu quý và đã được chứng minh là có chứa nhiều hoạt chất có lợi cho sức khỏe, như adenosine, cordycepin, pentostatin, polysaccharide, carotenoid. Do đó, loài nấm này gần đây được coi là mô hình triển vọng để nghiên cứu cơ chế phân tử của quá trình hình thành quả thể và sinh tổng hợp các chất có hoạt tính sinh học. Phát triển các hệ thống chuyển gen hiệu quả ở C. militaris sẽ góp phần quan trọng trong việc thực hiện các nghiên cứu cải biến di truyền loài nấm dược liệu này. Trong nghiên cứu hiện tại, một chủng C. militaris thu thập tại Việt Nam được định danh chính xác về mặt phân loại dựa trên các đặc điểm hình thái và giải trình tự cùng ITS của rDNA. Chủng này được đặt tên là C. militaris G12 và được sử dụng để nghiên cứu chuyển gen. Chủng C. militaris G12 được đánh giá về mức độ mẫn cảm với ba loại kháng sinh phổ biến dùng trong chuyên gen là hygromycin, nourseothricin và phleomycin. Kết quả cho thấy chủng C. militaris G12 chi bị ức chế bởi hygromycin ở nông đo 200 µg/ml. Hiệu quả chuyển gen vào chủng C. militaris G12 nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens với marker chọn lọc là gen kháng hygromycin đạt trung bình 800 thể chuyển gen/10° bào tử. Việc chuyển thành công gen chỉ thị DsRed và GFP vào hệ gen của C. militaris G12 đã được xác nhận bằng PCR với các cặp mồi đặc hiệu.
Cordyceps militaris is a valuable edible and medicinal mushroom, which has been demonstrated to possess beneficial ingredients such as adenosine, cordycepin, pentostatin, polysaccharides, and carotenoids. Therefore, this fungus represents a promising cell factory for investigating the molecular mechanism of fruiting body formation and biosynthesis of bioactive metabolites. The development of efficient transformation systems in C. militaris plays an important role in the genetic manipulation of this fungus. In the present study, a commercial strain of C. militaris isolated in Vietnam has been identified on the basis of morphological characteristics and the ITS (internal transcribed spacer) sequence of ribosomal DNA. This strain was designated as G12 and employed for the genetic transformation. Assays for antifungal sensitivity of the C. militaris G12 strain towards three antifungal compounds including hygromycin, nourseothricin, and phleomycin revealed that this C. militaris strain was inhibited only by hygromycin at the concentration of 200 μg/ml. Under optimised conditions for the genetic transformation of the strain G12 using the hygromycin resistance marker and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation method, the transformation efficiency could reach about 800 transformants per 106 spores. Further, the transfer of the DsRed and GFP reporter genes into the genome of C. militaris G12 has been demonstrated to be successful by PCR analyses with the gene-specific primers.
- Đăng nhập để gửi ý kiến