
Xây dựng quy trình phát hiện đột biến trên gen K13và bước đầu xác định tần số đột biến trên gen này ở các mẫu lâm sàng. Phương pháp nghiên cứu: các mẫu ADN được tách chiết từ các mẫu máu của 50 bệnh nhân thất bại điều trị với artermisin thu thập tại khu vực Tây Nguyên. Đoạn gene K13được nhân với các cặp mồi đặc hiệu, giải trình tự bằng phương pháp Sanger và phân tích đột biến sử dụng phần mềm Bioedit. Kết quả nghiên cứu: khuếch đại thành công đoạn genK13 có kích thước 799 bp ở chủng P. falciparum, sau khi giải trình tự phát hiện có sự thay thế nucleotide A>G tại vị trí 1740, dẫn tới sự thay đổi axit amin C>Y ở vị trí 580 tương ứng. Trong 50 mẫu bệnh phẩm, 41/50 (82%) mẫu xuất hiện đột biến C580Y và 9/50 (18%) mẫu không mang đột biến, ngoài ra không xuất hiện đột biến nào khác. Thiết lập và tối ưuđược quy trìnhphát hiện đột biến kháng artermisinin trên gen K13 ở ký sinh trùng (KST) sốt rét P. falciparum và xác định tần số đột biến này trên gen K13.
Objective: this study aims to develop a methodology for detecting mutations in the K13 gene and determine mutation frequencies in clinical samples. Method: total DNAs were extracted blood samples collected from 50 patients in failure with artemisinin treatmentin the Central Highlands region. A fragment of the K13 gene was amplified, purified, and sequenced by the Sanger method. The K13 sequences were analysed by using Bioedit and aligned with the reference sequence to determine K13 mutations. Results: successfully amplified the K13 gene segment with size 799 bp in P. falciparum. After sequencing, there was a nucleotide substitution of A>G at position 1740, leading to changes in amino acids C>Y at the respective position 580. In the 50 patient samples, 41/50 (82%) samples showed the C580Y mutation, 9/50 (18%) of the samples had no mutation, and there was no other mutation. Conclusion: the authors have successfully developed and optimised a procedure for detecting the mutation C580Y in K13 in P. falciparum and determined the mutation frequency in the K13 gene.
- Đăng nhập để gửi ý kiến