Nghiên cứu quy trình phát hiện gắn chèn gen gây ung thư E6 và E7 của Human papilomavirus (HPV) type 16 vào bọ gen người nhằm chẩn đoán sớm ung thư cổ tử cung được thực hiện bằng kỹ thuật multiplex RT-PCR. mồi được thieeys kế dựa vào trình tự gen E6 và E7 của HPV type 16 bằng phần mềm clustal X 1.81 (EMBL, châu Âu) và Annnhyb 4.922 (Oliver Friard, Hoa Kỳ). m RNA của gen E6 và E7 được trích ly bằng phương pháp sử dụng phenol/chloroform. Phản ứng two - step Multiplex RT-PCR trên máy C1000 Thermal Cycler (Biorad). Sản phẩm PCR điện di xuất hiện vách 287 bp và 183 bp của mRNA E6 và E7. Nghiên cứu tối ưu quy trình thu được: nhiệt độ lại tại 56 độ C, nồng độ hệ mồi 400nM đối với mRNA E6 và 500 nM đối với mRNA E7, nồng độ Mg 2+ là 2mM, nồng độ dNTPs là 200 microM. Giới hạn phát hiện của quy trình là 10 mũ 3 bản sao mRNA E6 và E7/ml. Ngoài ra, một đoạn amplicon có kích thước 400bp luôn được bổ sung trong mỗi phản ứng ở nồng độ 10 mũ 4 copies/ml dùng làm chứng nội. Kết quả giải trình tự sản phẩm PCR cũng khẳng định tính đúng của quy trình và có 1/86 mẫu dịch phết cổ tử cung thu thập tại Buôn Ma Thuột, Đắk Lắk có gắn chèn gen E6 và E7cuar HPV type 16 vào bộ gen người.
- Đăng nhập để gửi ý kiến