Nghiên cứu có mục tiêu là thiết lập được quy trình xác định kiểu gen của điểm đa hình rs776746 G/A của gen CYP3AS ở bệnh nhân ghép thận bằng phương pháp PCR-RFLP. Thiết kế mồi và lựa chọn enzyme giới hạn cho thiết lập quy trình xác định kiểu gen của điểm đa hình rs776747 G/A. Các mồi xuôi và mồi ngược lần lượt là 5-CAT GAC TTA GIA GAC AGA TGA-3' và 5'- GGT CCA AAC AGG GAA GAA ATA-3' Enzym cắt giới hạn là SspI. Một đoạn gen kích thước 293 bp chưa điểm đa hình rs776746 G/A được khuếch đại với cặp mồi đặc hiệu. Enzym SsPI nhận diện trình tự cát là AATATT trong đoạn gen được khuếch đại bằng PCR tạo ra các đoạn có kích thước lần lượt là 148 bp và 125 bp đối vá điểm đa hình là G allele hay kiểu gen đồng hợp GG. Khi điểm đa hình là A allele thì enzyme SspI cắt và tạo ra đoạn có kích thước tương ứng là 168 bp và 125 bp hay kiểu gen đông hợp AA. Kiều gen dị hợp AG tương ứng với các đoạn có kích thước lần lượt là 168, 148, 125 bp. Các kiểu gen này có thể phân biệt rõ ràng trên hình ảnh điện di agarose 2%. Khi so sánh với phương pháp giải trình tự cho kết quả tương đông là 100%. Chúng tôi đã lập được quy trình đơn giản, dê thực hiện và tiết kiệm chi phí cho xác định kiểu gen của điểm đa hình rs 776747G/A.
- Đăng nhập để gửi ý kiến