Đánh giá tính khả thi của việc áp dụng quy trình PGT-A của bộ Kit Ion ReproSeq PGS Kits vào xét nghiệm di truyền tiền làm tổ không xâm lấn niPGT. Tối ưu thể tích buffer lysis phục vụ quá trình khuếch đại DNA tự do từ dịch nuôi cấy. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 6 mẫu dịch nuôi cấy của các phôi ngày 5 có kết quả PGT-A bất thường được sử dụng để đánh giá tính khả thi trong việc áp dụng quy trình PGT-A bộ Kit Ion ReproSeq PGS Kits vào niPGT-A cũng như tối ưu hoá thể tích buffer lysis phục vụ quy trình này. Kết quả: Quy trình với 5μL môi trường nuôi cấy phôi (SCM) và 2,5μL CEB có nồng độ thư viện DNA thấp hơn hiệu suất quy trình tiêu chuẩn (2,5μL SCM và 2,5μL CEB). Quy trình với 5 μL SCM và 5μL CEB có nồng độ thư viện DNA cao hơn hiệu suất quy trình tiêu chuẩn. Quy trình với 5μL SCM và 5μL CEB có nồng độ thư viện DNA không ổn định. Biểu đồ CNV thu được từ việc giải trình tự các mẫu được khuếch đại bằng các quy trình khác nhau đều xác định được các bất thường NST của phôi. Kết luận: Xét nghiệm di truyền tiền làm tổ không xâm lấn niPGT với bộ Kit Ion ReproSeq PGS Kits có thể ứng dụng vào lâm sàng. 5μL SCM và 5μL CEB là thể tích tối ưu được đề nghị sử dụng để tăng hiệu suất tạo thư viện DNA.
Evaluate the feasibility of applying the Ion ReproSeq PGS Kits into the non-invasive preimplantation genetic test niPGT. Optimize lysis buffer volume for whole genome amplification in niPGT. Research subjects and methods: 6 spent culture mediums of day-5 embryos with abnormal PGT-A results were used to evaluate the feasibility of applying the Ion ReproSeq PGS Kits for PGT-A into niPGT-A as well as optimizing the lysis buffer volume for this process. Results: DNA library concentration in the protocol with 5μL SCM và 2.5 μL CEB is lower than its standard protocol. DNA library concentration in the protocol with 5μL SCM và 5 μL CEB is higher than its standard protocol. In the protocol with 10μL SCM và 5 μL CEB, the efficiency of producing DNA library concentration is unstable. The CNV charts indicated that the protocol of using Ion SingleSeq™ (Thermo Fisher) to perform the whole genome amplification of cfDNA extracted from SCM and Ion Proton™ Sequencer system to sequence WGA samples was able to detect chromosome abnormalities. Conclusion: The Thermo Ion ReproSeq PGS Kit together Ion Proton™ Sequencer system can be used for performing Non-invasive preimplantation genetic testing (niPGT) in clinical trials. The protocol with 5μL SCM and 5μL CEB is recommended to use.
- Đăng nhập để gửi ý kiến