Tổng hợp tạp F allopurinol ở quy mô phòng thí nghiệm, đủ điều kiện để thiết lập chất chuẩn đối chiếu tại Việt Nam. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Tạp F allopurinol được tổng hợp từ ethyl(ethoxymethylen)cyanoacetat và hydrazin hydrat 50% với tỷ lệ mol, nhiệt độ và thời gian phản được khảo sát đảm bảo quy trình dễ tinh chế, đạt hiệu suất và độ tinh khiết cao. Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết bằng HPLC-PDA, đánh giá độ đồng nhất lọ và xác định giá trị công bố thông qua đánh giá kết quả tại 3 phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn GLP tại Viện kiểm nghiệm thuốc TP.HCM. Kết quả: Tổng hợp thành công tạp F allopurinol từ ethyl (ethoxymethylen) cyanoacetat và hydrazin hydrat 50% với tỷ lệ mol 4:1; nhiệt độ phản ứng 60 oC, thời gian phản ứng ngắn 30 phút. Sản phẩm được xác định cấu trúc bằng phổ nghiệm UV-Vis; IR có đối chiếu với chuẩn, phổ khối phân giải cao, phổ 13C-NMR, 1H-NMR cho kết quả phù hợp với cấu trúc tạp F allopurinol. Quy trình xác định độ tinh khiết bằng HPLC-PDA được thẩm định với pha tĩnh: cột Gemini – NX C18 (15 cm; 4,6 mm; 5 μm), nhiệt độ cột: 25 °C, pha động: acetonitril – acid formic pH = 2,5 (35:65), tốc độ dòng: 1 ml/phút, nồng độ 50 μg/ml trong pha động, thể tích tiêm mẫu: 10 μl, đầu dò: bước sóng 254 nm. Kết quả đánh giá liên phòng thí nghiệm với độ tinh khiết đạt giá trị công bố 99,5%. Kết luận: Đã tổng hợp được 2,5 g tạp F allopurinol ở quy mô phòng thí nghiệm có độ tinh khiết trên 99%, xây dựng được quy trình xác định độ tinh khiết tạp F bằng HPLC-PDA đủ điều kiện thiết lập chất chuẩn đối chiếu sử dụng trong kiểm nghiệm thuốc.
Allopurinol is a priority drug prescribed in gout treatment and is currently listed as an essential drug by the Ministry of Health of Vietnam. Impurity F allopurinol (Ethyl-(E/Z)-3-(2- carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4- carboxylate) is an impurity in processing the synthesis of allopurinol that has the potential to cause cancer mutated and regulated under mandatory testing in USP-NF-2023 [2],[6]. However, the F allopurinol impurity standard is currently very expensive (over 800 USD/25mg) and is not readily available, affecting testing and drug quality control [7]. Objectives: Synthesis of F allopurinol impurities at laboratory scale qualified to establish reference standards in Vietnam. Materials and methods: Impurity F allopurinol is synthesized from ethyl (ethoxymethylene) cyanoacetate and hydrazine hydrate 50% with molar ratio and temperature and reaction time were investigated for ease of purification and high purity. Developed a process to determine purity using HPLC-PDA and evaluated vial uniformity and purity values at 03 GLP laboratories in the Institute of Drug Quality Control in Ho Chi Minh City. Results: Successfully synthesized F allopurinol from ethyl(ethoxymethylene)cyanoacetate and hydrazine hydrate 50% with molar ratio 4 :1; reaction temperature 60oC, for 30 minutes. The substant structure was determined by UV-Vis spectroscopy; IR compared with standard, MS high-resolution, 13C-NMR, and 1H-NMR spectra showed results consistent with the F allopurinol impurity structure. The purity determination procedure by HPLC-PDA was validated with stationary phase: Gemini – NX C18 column (15 cm; 4.6 mm; 5μm), column temperature: 25 °C, mobile phase: acetonitrile – formic acid, pH = 2.5 (35:65), flow rate: 1 ml/min, sample concentration 50 μg/ml in mobile phase, sample injection volume: 10 μl, wavelength 254 nm. Results of interlaboratory evaluation of purity with published value reached 99.5%. Conclusion: 2.5g of allopurinol F impurity has been synthesized on a laboratory with a purity of over 99%, and a process for determining the F impurity purity by HPLC-PDA has been developed to qualify for establishing a reference standard.
- Đăng nhập để gửi ý kiến